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人源LDHA基因启动子质粒的构建及在肺癌细胞中Nrf2对其转录表达调控和功能分析
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摘要
为探索核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)调节肿瘤代谢进而影响肿瘤细胞迁移的分子机制,着重研究了Nrf2对乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenaseA,LDHA)表达的调控.首先成功构建了人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc.将质粒LDHA-luc与Nrf2表达载体共同转染A549细胞,转染后经双荧光素酶报告基因系统检测,显示共转Nrf2质粒时LDHA-luc活性明显要比对照组高;同时,转染Nrf2质粒时LDHA的蛋白质表达水平明显高于对照组,表明在A549细胞中Nrf2促进LDHA的转录和表达.而LDHA的上调会促进酸性肿瘤微环境的形成,促进细胞迁移.因此,成功构建的人源LDHA基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因质粒LDHA-luc及探索出的Nrf2对LDHA基因表达的调控,为进一步研究Nrf2通过LDHA影响细胞代谢进而促进细胞迁移奠定了基础.%In order to investigate the effect of nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) on tumor metabolism and,consequently,tumor migration,we focused on regulation of lactate dehydrogenase A (LDHA) expression by Nrf2.Herein,the plasmid LDHA-luc containing the firefly luciferase reporter gene driven by human LDHA gene promoter was successfully constructed,and transfected into A549 cells together with Nrf2 expresion vector.After transfection,the dual luciferase reporter gene assay system showed that the LDHA promoter activity in cells transfected with Nrf2 plasmid was significantly higher than that of the control.Meanwhile,the expression level of LDHA in cells transfected with Nrf2 plasmid was also higher,indicating that Nrf2 promoted transcription and expression of LDHA in A549 cells.Up-regulation of LDHA promotes the formation of acidic tumor microenvironment and cell migration.Therefore,successful construction of the plasmid LDHA-luc and demonstration of LDHA gene expression regulation by Nrf2 lay a foundation for further research on how Nrf2 influences tumor metabolism to promote cell migration through LDHA.
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安徽师范大学生命科学学院,中国安徽芜湖241000;
皖南医学院检验学院,中国安徽芜湖241002;
皖南医学院临床医学院,中国安徽芜湖241002;
皖南医学院临床医学院,中国安徽芜湖241002;
安徽师范大学生命科学学院,中国安徽芜湖241000;
皖南医学院基础医学院生物教研室,中国安徽芜湖241002;
- 原文格式 PDF
- 正文语种 chi
- 中图分类 转化及克隆;
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关键词
乳酸脱氢酶A (LDHA); 核因子E2相关因子2(Nrf2); 萤火虫荧光素酶报告基因质粒; 转录表达分析; 细胞迁移;
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